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Dedicada a Nuestra Señora de la Asunción, se comienza su construcción sobre el emplazamiento de la iniciada tercera Colegiata gótica en 1527.
En el año 1582 Juan de Herrera proyecta sobre la planta basilical precedente un templo de tres naves y crucero.
En 1596, por voluntad de Felipe II, se concede a Valladolid el título de Ciudad, creándose entonces la Diócesis y su iglesia mayor pasa se convierte en Catedral.
Las obras de construcción se prolongan hasta el siglo XVIII, momento en el que Alberto Churriguera retoma el esquema herreriano y le da a la fachada principal su peculiar impronta barroca.
La torre construída en origen, dañada por el terremoto de Lisboa de 1755, se hundió en 1841. Ignorando el proyecto de Herrera, se levantó la torre actual, al lado contrario donde se ubicaba la caída. Dicha torre posee forma octogonal y está coronada desde 1923 por la estatua del Sagrado Corazón de Jesús.
En su interior destaca por albergar el retablo mayor de Juan de Juni y el Museo Diocesano y Catedralicio, inaugurado en 1965.